Этап между биопсией и отправкой образца в лабораторию PGT
Между биопсией и доставкой образца в лабораторию PGT проходит несколько важных этапов.
Как это часто бывает при диагностическом тестировании, преаналитический и аналитический этапы PGT проводятся в разных лабораториях: помещение образца биопсии в пробирку происходит в лаборатории ЭКО, а тестирование выполняется в молекулярной лаборатории.
Преаналитический этап PGT сложен с логистической и технической точек зрения по нескольким причинам. С логистической точки зрения каждый эмбрион должен отслеживаться от чашки Петри для биопсии до чашки Петри для культивирования и, наконец, до соломинки для замораживания. Каждый образец биопсии должен отслеживаться из чашки для биопсии до крошечной пробирки для ПЦР.
Ошибки отслеживания эмбрионов и биопсии
До недавнего времени не существовало коммерчески доступных автоматизированных систем для отслеживания отдельных образцов биопсии и эмбрионов. Совсем недавно одна компания начала предлагать такую систему. Чтобы понять насколько она эффективна и эргономична уйдет несколько лет. Мы используем систему собственной разработки для облегчения отслеживания эмбриона, образца биопсии и замораживаемой соломины с эмбрионом. Она включает в себя держатель для пробирки, экран, защищающий стеклянную соломинку от контакта с предметным столиком микроскопа, и Vitrocube™, удерживающий соломинки в пронумерованных отделениях.
Ошибки тьюбинга при биопсии
Даже под ультрасовременным бинокулярным микроскопом образец выглядит как крошечный серый предмет.
Образец биопсии крошечный и иногда может потеряться при перемещении между каплями промывочного буфера или из-за того, что он прилип к пипетке. Если это происходит во время переноса в пробирку, потеря образца может даже не быть очевидной для эмбриолога.
Даже опытный эмбриолог может в редких случаях спутать образец биопсии эмбриона с другим образцом, присутствующим в капле. Если вместо образца взять кусок мусора (обычно пластик), амплификации не произойдет.
Загрязнение кумулюсными клетками
Группа кумулюсных клеток также может, по крайней мере теоретически, иногда приниматься за фактическую биопсию. Несмотря на то, что для удаления всех кумулюсных клеток обычно принимаются надлежащие меры, это не всегда возможно, потому что иногда кумулюсные клетки сильно прилипают к блестящей оболочке. Это затрудняет их удаление без агрессивного пипетирования, которое может повредить ооцит или эмбрион. Поскольку этот риск практически невозможно полностью исключить, в случае мутации в одном гене во время тестирования проводится дополнительный этап, который гарантирует, что амплифицированный образец поступает из эмбриона, а не из кумулюсных клеток. На этом этапе требуется кровь от партнеров мужского и женского пола, чтобы убедиться, что амплифицированная ДНК принадлежит эмбриону. Это делает тестирование очень дорогостоящим, но дополнительные затраты в случае нарушений, связанных с одним геном, полностью оправданы. В то же время, из-за гораздо более низкого уровня риска при численном тестировании хромосом в PGT, этап проверки происхождения ДНК в образце биопсии опущен, что делает невозможным исключение загрязнения кумулюсными клетками или любым другим типом загрязнения ДНК.
Потеря образца биопсии после переноса в пробирку
Образец биопсии может иногда прилипать к стенке пробирки и высыхать. Также его ДНК может каким-либо образом ухудшаться до того, как образец попадет в испытательную лабораторию. Это редкое явление, но в этом случае результата не будет.